【产品名称】
通用名称：转基因植物 CamV35S 启动子核酸检测试剂盒（LAMP/ CRISPR 荧光检测法）
英文名称：CamV35S promoter Nucleic Acid Detection Kit（LAMP/ CRISPR Fluorescent Detection）
【规格】50T
【储存条件及有效期】-20℃±5℃，避光保存，反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【预期用途】本试剂盒适用于检测转基因植物的 CamV35S 基因，用于筛查待检测植物是否含有
CamV35S 成分。
【检验原理】本试剂盒采用 LAMP/CRISPR 恒温扩增荧光检测技术，提取植物核酸作为 LAMP 扩增模板，
若样品中存在目标元件，经过 LAMP 扩增将富集到目标核酸序列，设计的特异 gRNA 会引导 Cas 酶与
扩增产物结合，激活 Cas 酶剪切活性，并剪切体系中的报告分子，报告分子被剪切后释放出可被仪器
检测到的荧光基团。
【试剂组成】
【使用方法】
1．样本前处理（样本处理区）
推荐采用山东舜丰生物科技有限公司研发的植物核酸快速释放剂，进行核酸快速释放，取
0.5cm×0.5cm 大小的叶片，加入核酸提取试剂 300μL，通过打样或者研磨将其破碎，离心后取上清即
可作为备用模板（注意不要吸到残渣或者泡沫），具体方法请参照植物核酸快速释放剂说明书。也可采
用其他核酸提取方法进行提取。
2．LAMP 扩增试剂配制（试剂准备区）
根据待测样本总数，设所需要的 LAMP 反应管数（N =1 管阴性对照+1 管阳性对照数+样本数；样
品每满 10 份，多配制 1 份），按照下表进行 LAMP 扩增体系配制，将混合好测试反应液充分混匀后瞬
时离心分装到 PCR 反应管（中间带有隔离层，试剂盒中配备），13μL /管。
3．加样（样本处理区）
3.1 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 2μL 分别加在上述 2.1 分装好的 LAMP 反应
管中，终体积 15μL /管，每管再加入 20-25μL 矿物油，可有效防止扩增反应过程中造成气溶胶污染。
盖好 PCR 管盖，混匀，瞬时离心 15sec，放置到预冷的 96 孔板金属模块上。
3.2 打开步骤 3.1 中的八连排管盖，加入 15μL Cas 酶切试剂至管盖上，再次将管盖轻轻地盖上，由于
液体表面张力作用使液体保持在管盖上不掉落。4．扩增（核酸扩增区）
将待检测反应管置于恒温扩增仪或普通 PCR 扩增仪，按照下表进行设置程序。
5．Cas 酶切反应（核酸扩增区）
待 LAMP 反应结束后，取出八连排瞬时离心 15sec，将 Cas 酶切体系与扩增体系进行混合。37℃
下进行反应 10-15min，如果采用恒温荧光扩增仪选 FAM 通道，若肉眼观察可以采用蓝光照胶仪或蓝
光滤光片进行拍照。
6．结果分析判定
6.1 质控标准
6.1.1 实时法（每 30sec 或 1min 采集一次 FAM 通道荧光值）
阴性对照：酶切荧光曲线无明显增长期；阳性对照：酶切荧光曲线有明显增长期。
6.1.2 终点法（反应开始时以及反应结束后各采集一次 FAM 通道荧光值，或是将体系置于蓝光下）
阴性对照：酶切结束后反应管内荧光值无明显增强（或无绿色荧光）；
阳性对照：酶切结束后反应管内荧光值显著增强（或有明显绿色荧光）。
6.1.3 如阴性和阳性对照不满足以上条件，此次实验视为无效。
6.2 样品检验结果判定 在满足质量控制的条件下待检样本检测结果判定如下：
6.2.1 实时法（每 30sec 或 1min 采集一次 FAM 通道荧光值）
酶切荧光曲线无明显增长期，表示结果阴性；酶切荧光曲线有明显增长期，表示结果阳性。
6.2.2 终点法（反应开始时以及反应结束后各采集一次 FAM 通道荧光值，或是将体系置于蓝光下）
酶切结束后反应管内荧光值无明显增强（或无绿色荧光），表示结果阴性；
酶切结束后反应管内荧光值显著增强（或有明显绿色荧光），表示结果阳性。
6.2.3 推荐采用终点法进行检测与判定。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 本产品检测灵敏度较高，样品核酸提取过程中避免交叉污染，严格分区；
3. 样品提取核酸质量太差时易造成假阴性，样本提取做好质量控制；
4. Cas 酶切体系加入盖上，由于表面张力酶切体系一般不会掉落，但关盖时仍要小心；
5. 如使用 PCR 仪进行扩增，需保持 PCR 热盖打开状态及取消热盖温度；
6. 试剂以及阳性对照需严格按照贮存条件进行贮存，避免反复冻融，以免造成试剂检测性能下降或
阳性对照核酸降解。
【产品性能】
与其他常见转基因元件（NOS terminator, or HPT）无交叉反应。
转基因元件成分最低检出限为 0.01%。
【适用仪器】
扩增：各类恒温扩增仪，或恒温荧光扩增仪。
检测：含 FAM 检测通道的各类荧光检测仪或蓝光照胶仪。
发表评论 取消回复